Mikrowellenunterstützter enzymatischer Aufschluss

Der enzymatische Verdau ist ein wichtiger Schritt in der Probenvorbereitung zur Sequenzanalyse von Proteinen und Peptiden mittels Massenspektrometrie. Dabei werden die Proteine oder Peptide durch verschiedene selektive Enzyme (z. B. Glu-C) an bestimmten Schnittstellen gespalten und ein großes Polymer dabei in einige kleinere Fragmente geschnitten, die sich deutlich leichter sequenzieren lassen. Dieser Prozess wird durch Einsatz der Mikrowelle deutlich beschleunigt.

Anwendungsbeispiele

Ein klassisches Beispiel ist der Transferrin-Verdau. Der konventionelle Verdau dauert je nach Qualität des schneidenden Enzyms bis zu16 Stunden. Der Verdau mit Mikrowellenunterstützung im Discover dauert demgegenüber nur 10 min. Zudem sind in Mikrowelle Schnitte realisierbar, die konventionell praktisch gar nicht stattfinden, so dass z.B. beim Transferrin-Verdau die Qualität des mikrowellenunterstützen Verdaus um 10% besser ist als auf dem konventionellem Wege.

[Jennifer Rutherford, Joe Bonapace, Mai-Loan Ngyen, Tonya Pekar, and John Pirro of Charles River Proteomic Services, Worcester, MA. High Throughput Protein Identifications Utilizing Microwave Protein Digests and Off-line Nano-spray Chip Technology (Poster Presentation) Oct 8, 2004].

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A. Mirza, Yao Hain Ing, Yan-Hui Liu, Peter L. Bartner, Patricia C. Weber and Ajay K. Bose, Schering-Plough Research Institute, Kenilworth, NJ 07033, USA, and George Barasch Bioorganic Research Laboratory, Department of Chemistry and Chemical Biology, Stevens Institute of Technology, Hoboken, NJ 07030, USA. Protein Science 2002, 11, 2676-2687.

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by Luchuan Mi, Hubert W. Vesper, Maria Ospina and Gary L. Myers, Protein Biomarker Laboratory, Division of Laboratory Sciences, National Center for Environmental Health, Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, Georgia, USA. Poster Presentation at ASMS Conference on Mass Spectrometry, Nashville, TN 2004.

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by Shan-Shan Lin, Chi-Hong Wu, Mei-Chuan Sun, Chung-Ming Sun and Yen-Peng Ho, Department of Chemistry, National Dong Hwa University, Hualien, Taiwan.J . Am. Soc. Mass Spectrom 2005, 16, 581-588.

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by Hubert W. Vesper*, Luchuan Mi, Archibold Enada and Gary Myers, Division of Laboratory Sciences, National Center for Environmental Health, Centers for Disease Control and Prevention, 4770 Buford Highway, NE (MS-F25), USA. Rapid Communications in Mass Spectrometry 2005, 19, 2865-2870.

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by Wei Sun, Shijuan Gao, Linjie Wang, Yong Chen, Shuzhen Wu, Xiaorong Wang, Dexian Zheng and Youhe Gao, Proteomics Research Center and National Key Laboratory of Medical Molecular Biology, Institute of Basic Medical Sciences, Peking Union Medical College/Chinese Acadamy of Medical Sciences, Beijing 100005, China. Mol. Cell. Proteomics 2006, 5, 769-776.

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